Tinciones

La tinción es un proceso bioquímico que generalmente se lleva a cabo para aumentar el contraste de una imagen microscópica

• La tinción es importante para la microscopia, el uso de diferentes colorantes permite observar la conformación de diversas estructuras.
• Las técnicas microscópicas son usadas en las áreas de hematología, histopatología y microbiología clínica para estudiar y diagnosticar enfermedades a nivel microscópico.
• Los colorantes empleados en las tinciones se pueden utilizar para definir los tejidos biológicos, las poblaciones celulares o los orgánulos subcelulares.
• El propósito de la tinción puede variar, ya que algunas técnicas de tinción permiten diferenciar entre dos grupos de microorganismos (Tinción de Gram), mientras que otros se usan para observar la motilidad y la presencia de cápsulas.
• Los microscopios de campo claro se usan comúnmente para observar células teñidas u otros materiales biológicos para distinguir entre la muestra y el fondo.
• La tinción es de diferentes tipos según su finalidad; tinción simple usando una sola mancha para proporcionar un contraste entre la muestra y el fondo; tinción diferencial utilizando más de un tinte para diferenciar entre células o entre orgánulos de una célula.
• Entre todas las técnicas de tinción, la tinción de Gram es la técnica más popular que se utiliza para diferenciar entre microorganismos Gram-positivos y Gram-negativos.
• Otras técnicas de tinción incluyen tinción de endosporas para endosporas, tinción acidorresistente para organismos exigentes, ácido peryódico de Schiff (PAS) para biomoléculas, tinción de Romanowsky para diferenciar entre células sanguíneas, Tinción de Giemsa para hemoparásitos, tinción de Wright para células sanguíneas y la Tinción de rojo Congo para cápsulas.

Tipos de Colorantes

Los colorantes se pueden clasificar según su origen o según su naturaleza química. Si atendemos a su origen tenemos la siguiente clasificación:

Naturales: Los colorantes naturales se subdividen, a su vez, en orgánicos e inorgánicos. Los orgánicos se subdividen, también, según su naturaleza animal o vegetal.

Sintéticos: Los colorantes sintéticos adquieren la clasificación que se le atribuye a los colorantes tradicionales, conformados por colorantes ácidos, básicos, neutros e indiferentes.

Según su naturaleza química tenemos los siguientes colorantes, que serán definidos en el siguiente apartado:

1. Colorantes ácidos: Tienen especial afinidad por las estructuras básicas de las células, como por ejemplo la hemoglobina. Algunos ejemplos son la eosina y el ácido pícrico.
2. Colorantes básicos: Tienen especial afinidad por las estructuras ácidas de las células, como por ejemplo los ácidos nucleicos. Algunos ejemplos son el azul de metileno, el azul de toluidina o la hematoxilina.
3. Colorantes neutros: Están compuestos por sales de un ácido y de una base coloreados. Tiñen el núcleo de un color y el citoplasma de otro. Un ejemplo es el eosinato de azul de metileno.
4. Colorantes indiferentes: No tienen ninguna afinidad por estructuras ácidas o básicas. Además, presentan insolubilidad al agua. Ejemplo de ello, es el colorante Sudán III.

Colorantes Vitales: Las tinciones vitales son tinciones que se realizan sobre células vivas, manteniéndoles en dicho estado. La técnica se basa en la introducción de un colorante en la circulación de un organismo vivo.

• No alteran el metabolismo de las células,  ni presentan toxicidad.
• Su coloración dura poco tiempo.
• Permite la observación de la actividad locomotora, así como la función que llevan a cabo mediante algún proceso de movimiento

Colorantes Vitales Básicos

- Rojo neutro

- Azul de metileno

- Verde Jano

- Azul Jano

- Azul naftol

- Violeta neutral

Colorantes Vitales Ácidos

- Alizarina roja S

- Púrpura brillante R

- Azul trypan

Colorantes Supravitales

Las tinciones supravitales involucran el coloreo de células o estructuras que han sido removidas de su contexto biológico, un ejemplo de ellas serían las biopsias.

• Se utilizan el frotis sanguíneos, como la tinción de Giemsa y Wrigth.
• Se basa en la detención de el metabolismo de las células mediante un proceso térmico o químico para la conservación de las estructuras célulares.
• Dependiendo del tratamiento, puede realizarse para la elaboración de montajes permanentes.
• No permite la observación de la movilidad o funciones de locomoción de las células, como de espermatozoides, bacterias o protozoarios. 

Colorantes no vitales

Las tinciones no vitales son aquellas que se realizan sobre células muertas, Estas técnicas requieren un paso previo, que es la fijación de dichas células al portaobjetos haciendo uso de calor, etanol o metanol, con la particularidad de mantener inalteradas las estructuras de los diferentes componentes celulares.los frotis preparados en microbiología para observación de morfología serían un ejemplo de ellas

• Son utilizados ampliamente para el estudio en microbiología e histopatología.
• Su abarca el area de hematología

Tipos de preparaciones

Preparaciones húmedas

Preparaciones secas

Tipos de tinciones

Tinción simple: Nos muestra la morfología microscópica de la célula, la cual incluye forma, disposición y tamaño relativo, utilizada en preparaciones secas y húmedas.

• Permite la observación morfológica del microorganismo y su agrupación.
• La variedad de colorantes permiten identificar la composición y la afinidad que va a tener la pared celular.
• Es un método de tinción rápido que emplea un solo colorante, sin mordente, decoloración u otro colorante, además de ser económico.
• Los colorantes empleados en la tinción simple deben ser básicos con carga positiva (catiónicos), para que puedan unirse espontáneamente a la pared y al citoplasma celular; estas estructuras son de carga negativa (anionicas) o ácidas y presentan una afinidad basofila por los colorantes.

Colorantes empleados en la tinción simple

Existen varios colorantes básicos que se pueden usar en el laboratorio de microbiología. Los más empleados son:

– Azul de metileno.

– Violeta de cristal.

– Verde malaquita.

– Fucsina básica.

Todos estos colorantes funcionan bien en las bacterias porque tienen iones de color (cromóforos) con carga positiva (catiónicos).

Tinción diferencial: La tinción diferencial permite discernir entre dos grupos de bacterias como la Tinción de Gram, que permite diferenciar entre grampositivas y gramnegativas.

- Tinción de Gram

Tinción especial: Permite identificar estructuras, algunas cuales son, endosporas, ciertas estructuras y propiedad en la pared celular, flagelos, capsulas, inclusiones intracelulares, etc.

- Tinción de Ziehls-Neelsen

- Tinción de Endosporas

- Tinción de Cápsula

- Tinción de Gránulos metacromáticos. 

Métodos de tinción

Tinción Directa

Tinción Indirecta