Prueba Catalasa

Uso

La prueba permite identificar y dividir en dos grandes grupos, los microorganismos catalasa positivos y los microorganismos catalasa negativos. Sirve para la identificación y diferenciación de Streptococcus (-) de Micrococcus (+) y/o Staphylococcus (+), Bacilos como Bacillus (+) de  Clostridium (-); Listeria monocytogenes (+) y/o Corynebacterium (+) de Erysipelothrix(-).

Fundamento

La catalasa es una enzima que poseen la mayoría de las bacterias aerobias que contienen citocromo a excepción de Streptococcus sp. Descompone el Peróxido de hidrogeno (H2O2) en agua y oxigeno bajo la formula 2 H2O2----2 H2O + O2. Este es un mecanismo de defensa de las bacterias para protegerse del efecto tóxico del peróxido de hidrogeno, que es un metabolito final del metabolismo aerobio de los azucares.

Aparentemente la ausencía de catalasa en los microorganismos anaerobios, es la causa la mortalidad. En presencía de oxígeno, la cadena transportadoras de electrones usa el oxigeno como aceptos de electrones y se forma agua oxigenada, pero ésta no puede ser degradada en agua y oxígeno, por la ausencia de la catalasa, por lo tanto se acumula e inactiva a los microorganismos anaerobios.

Reactivos

• Portaobjetos. 
• H2O2 de 10 volúmenes 
• Cultivos en fase exponencial.
• Palillos de madera 
• Pipetas Pasteur.

Procedimiento

Procedimiento en Portaobjetos

1. Colocar una gota de agua oxigenada sobre un portaobjetos con ayuda de una pipeta Pasteur.

2. Sumergir el palillo de madera en solución salina esteril/medio de cultivo. 

2.1 Usar Asa de siembra y tomar una colonia (medio solido) o sumergirlo en el medio liquido.

3. Tomar la muestra/microorganismo y suspender en la gota de agua oxigenada.

3. Interprete sus resultados basandose en que la prueba es positiva si hay producción de burbujas, mientras que en ausencia de burbujas se considera negativa.

Procedimiento en Placa

1. Inocule por estría la superficie del agar nutritivo en placa

2. Incube los medios a 37 ºC por 24 a 48 h.

3. Agregue unas gotas de peróxido de hidrógeno sobre las colonias de los cultivos de los microorganismos y observe buscando la formación inmediata de burbujas y espuma en la superficie del medio.

4. Interprete sus resultados basándose en que la prueba es positiva si hay producción de burbujas, mientras que si no se forman se considera catalasa negativa.

Nota: El peróxido de hidrógeno es muy inestable y debe pasar por un control de calidad antes de emplearse.

Procedimiento en Tubo

1. Adicione 5 ml de Peroxido de Hidrogeno en un tubo

2. Con un Asa de siembra tomar la colonía/bactería de un cultivo puro

3. Introducir el asa en el tubo

4. Interprete sus resultados basandose en que la prueba es positiva si hay efervescencía/burbujas, mientras que en su ausencía se considera que es Negativa.

Reacción e Interpretación

Reacción en Tubos

Reacción en Portaobjetos

La interpretación de la prueba se basa en la efervescencía generada o liberación de oxigeno en estado gaseoso atrapado en burbujas que se ven en el medio/liquido en el que se adiciona el peroxido.

Microorganismos

●Streptococcus(-) de Micrococcus y/o Staphylococcus (+).

●Bacillus(+) del Clostridium(-)

●Listeria monocytogenes (+) y/o Corynebacterium (+) del Erysipelothrix (-)