La confirmación de Staphylococcus aureus está basada en una fuerte reacción de coagulasa, pero se reconoce que hay algunas cepas de S. aureus que producen una reacción débil. Estas últimas cepas se pueden confundir con otras bacterias, por lo cual es de igual importancia someter a la par la prueba de termonucleasa y por medio del uso de pruebas adicionales, como son la producción de ácido a partir del manitol.
Caracteristicas
- Morfología: Cocos- Estafilococo o forma de racimo
- Metabolismo: Anaerobios facultativos y aerobios, halotolerante y osmotolerantes.
- Gram: Gram positivo
- No esporulados
Alimentos asociados
Carnes crudas y procesadas, ensaladas de carne, productos de pastelería y productos de leche, huevo, atún, pollo, papa y macarrones, también en chocolate y Sándwiches. Es halotolerante así que puede estar en carnes curadas, jamones, etc.
Medios de cultivo
Medio Sal y Manitol se utiliza para el aislamiento selectivo de estafilococos, diferenciación de estafilococos positivos a la coagulasa (por ejemplo, Staphylococcus aureus) de los estafilococos negativos a la coagulasa.
Staphylococcus aureus: Colonias amarillas de tamaño mediano, amarillo medio.
Staphylococcus epidermidis: Colonias blancas de tamaño pequeño a mediano, rojo mediano.
Medio Baird-Parker: medio parcialmente selectivo que utiliza la capacidad de los estafilococos de reducir el telurito a telurio y detectar la lecitinasa a partir de la lecitina del huevo. MUESTAS > 100 UFC/g
Pruebas bioquimicas
Las pruebas se llevan a cabo
en agar AST
Prueba
coagulasa Medio BHI (Brain Heart Infusion) plasma de conejo con EDTA.
El plasma de coagulasa de conejo es un plasma de conejo estandarizado,
liofilizado, empleado para la detección cualitativa de la enzima coagulasa
producida por Staphylococcus aureus.
Resultados
Figura 3. Resultados de la
prueba coagulasa, tubo positivo (izquierda) se observa un coagulo por la
actividad de la enzima coagulasa sobre el plasma de conejo. El tubo negativo
(derecha), se encuentra sin coagulo, el inoculo no produce la enzima para
realizar la coagulación del plasma de conejo.
Prueba termonucleasa
Agar
Azul toluidina-DNA (Ácido Desoxirribonucleico) permite detectar
la termonucleasa, en correlación con la enterotoxina estafilocócica
termorresistente.
Las bacterias que contienen desoxirribonucleasa hidrolizan el DNA, produciendo la aparición de un halo transparente alrededor de las colonias.
La
zona de hidrólisis se demuestra por la adición de ácido clorhídrico en la
superficie del medio, que induce la precipitación de DNA y la opacificación del
medio. Aparece un halo transparente alrededor del cultivo cuando se ha
hidrolizado el DNA.
En el
caso de la revelación del azul toluidina, la desoxirribonucleasa bacteriana
actúa con la tinción para inducir metacromasia del medio (color rosa alrededor
de las colonias).
Resultados
S. aureus tiene precipitación del DNA por actividad de la enzima termonucleasa, opacificación rosa del medio por metacromasia del azul de toluidina con la desoxirribonucleasa.
Figura 4. Resultados de la prueba
termonucleasa, se observan colonias pasada las 24 horas. Colonias rosas (S.
aureus) positivas para la actividad de la DNA-asa. Colonias azules, negativas a
la producción de DNA-asa.
La catalasa es una enzima que poseen la mayoría de las bacterias Staphylococcus. Descompone el peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno.
Utilizar el cultivo en agar AST (Agar Soya tripticaseina)
Figura 5. Resultados de la prueba catalasa. Porta objetos A (superior)
sin burbujas, el inoculo no presenta actividad de la enzima catalasa.
Portaobjetos B (inferior) con actividad de enzima catalasa, característico de
S. aureus.
Prueba
fermentación de glucosa / manitol
Agar rojo de fenol Glucosa Manitol: El caldo rojo de fenol solo lleva un carbohidrato a la
vez. Staphylococcus aureus puede fermentar glucosa y manitol en
anaerobiosis. Se puede utilizar el caldo BHI o AST adicionado con Rojo de
fenol.
Figura 6. Resultado de la prueba de Rojo de fenol fermentación glucosa.
Se observa un tubo negativo (izquierda) de color rojo de fenol, el tubo
positivo (derecha) se debe a la fermentación de la glucosa o manitol, generando
acido y cambiando el color del indicador.
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