Las pruebas bioquímicas permiten la determinación de un microorganismo previamente seleccionado de una colonia de algún agar Selectivo, estos medios diferenciales, permiten determinar las características metabólicas de las bacterias.
Las pruebas se pueden dividir en pruebas que se utilizan en la identificación preliminar y con lectura inmediata como la catalasa y oxidasa; otras pruebas rápidas, con lectura en menos de 6 horas tal y como la hidrólisis del hipurato, la β-galactosidasa (ONPG), las aminopeptidasas, la ureasa y el indol; otras pruebas lentas, con lectura de 18 a 48h que incluirían la óxido-fermentación, reducción de nitratos, rojo de metilo, Voges-Proskauer, Agar hierro de Kligler, fermentación de azúcares, hidrólisis de la esculina, coagulasa, fenilalanina-desaminasa, DNasa, hidrólisis de la gelatina, decarboxilasas, lipasa, lecitinasa, utilización de citratos, utilización de malonato, y prueba de CAMP entre las más frecuentes, y por ultimo las pruebas basadas en caracteres de resistencia a ciertas sustancias tal y como optoquina, bacitracina, solubilidad en bilis, y crecimiento en caldo hipersalino.
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